产品货号：
BTN15-66500
中文名称：
尔斯布朗病毒荧光定量PCR试剂盒(探针法)
英文名称：
Wesselsbron Virus qPCR Kit(Probe Method)
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本产品是为此目的根据PCR原理开发的试剂盒。
韦塞尔斯布朗病毒(Wesselsbron Virus、SV)引起韦塞尔斯布朗病(Wesselsbron disease、WSL)，它是一种经蚊虫传播的虫媒人畜共患传染病毒，主要感染羊和其他一些反刍动物，可引起绵羊和山羊的流产及羔羊死亡，也会感染人。随着我国与非洲国家交往的不断加强，国际贸易范围不断扩大，韦塞尔斯布朗病传入我国的风险不断加大，我国已明确将其列八从非洲进口反刍动物议定书的检疫要求中，掌握该病的流行状况、开展相应的诊断检测技术研究以及制订相关技术标准不仅十分必要而且迫在眉睫。
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
二、样品DNA的制备
三、Probe qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
四、数据处理
相关搜索：尔斯布朗病毒荧光定量PCR试剂盒(探针法)，Wesselsbron Virus qPCR Kit(Probe Method)
韦塞尔斯布朗病毒(Wesselsbron Virus、SV)引起韦塞尔斯布朗病(Wesselsbron disease、WSL)，它是一种经蚊虫传播的虫媒人畜共患传染病毒，主要感染羊和其他一些反刍动物，可引起绵羊和山羊的流产及羔羊死亡，也会感染人。随着我国与非洲国家交往的不断加强，国际贸易范围不断扩大，韦塞尔斯布朗病传入我国的风险不断加大，我国已明确将其列八从非洲进口反刍动物议定书的检疫要求中，掌握该病的流行状况、开展相应的诊断检测技术研究以及制订相关技术标准不仅十分必要而且迫在眉睫。
- 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
- 引物和探针经过优化，灵敏性高。
- 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
- 特异性高，引物是根据人韦塞尔斯布朗病毒高度保守区设计，不会跟其他病毒的DNA发生交叉反应。
- 本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
- 本产品只能用于科研。
| 组分 | 规格 |
| 2×Probe qPCR MagicMix | 0.5mL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL 韦塞 |
| 尔斯布朗病毒探针法qPCR引物混合液 | 100μL 韦塞 |
| 尔斯布朗病毒qPCR探针 | 100μL 韦塞 |
| 尔斯布朗病毒PCR阳性对照(1×108拷贝/μL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
- 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同)。
- 在7号管中加入5μL 1×108拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×107拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
- 如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
- 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数花生DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的柱式植物DNA提取试剂盒。本试剂盒免费赠送20次免DNA提取的核酸释放剂，本产品的裂解液可以直接作为PCR模板，省略了DNA提取步骤。其使用手册可从本公司网站www.bjbalb.com
通过搜索产品名称核酸释放剂或产品货号：BTN61202下载。
三、Probe qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，1个用于PCR阳性对照(用第4号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
- 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
成分 样品管
N+2个PCR阴性
对照管曲线样品管
(2～7管)2×Probe qPCR MagicMix 10μL 10μL 各10μL
韦塞尔斯布朗病毒qPCR探针 1μL 1μL 各2μL
韦塞尔斯布朗病毒探针法qPCR 2μL 2μL 各2μL
引物混合液N+2个待测DNA模板 6μL 不加 不加 超纯水 不加 6μL 不加 第7步所得标准曲线样品稀释液(2～7号) 不加 不加 各6μL - 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：
过程 温度 时间 预变性 95℃ 5min PCR反应
(40个循环)95℃ 15sec 60℃ 60sec(采集FAM通道的荧光信号)
四、数据处理
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35～40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。
相关搜索：尔斯布朗病毒荧光定量PCR试剂盒(探针法)，Wesselsbron Virus qPCR Kit(Probe Method)